تضم مكتبة المسجد النبوي الشريف بين أرففها نفائس الكتب والمخطوطات النادرة والتراثية جنبا إلى جنب مع المؤلفات المختلفة التي يستفيد منها طلبة العلم الشرعي والدراسات العليا في إعداد رسائلهم الأكاديمية، إضافة إلى الزوار وهواة القراءة والاطلاع، وتحوي المكتبة أقساماً متعددة، منها قاعة المطالعة التي تشمل قاعات مطالعة للرجال وأخرى للنساء وأخرى للأطفال، وقسم آخر للمخطوطات يقع بالدور الثاني من باب عثمان بن عفان رضي الله عنه، إضافة إلى قسم المكتبة الصوتية الذي يُعنى بحفظ ما يلقى في الحرم الشريف من الدروس والخطب والصلوات، إلى جانب قسم فني يختص بتجليد وترميم وتعقيم المخطوطات، كما توجد أقسام للفهرسة والتصنيف والتزويد والدوريات والمستودع، والبحث والترجمة والإعارة، وتعمل المكتبة يومياً على مدار 24 ساعة طوال العام، ومن الممكن زيارتها في أي وقت، حيث بلغ عدد الموظفين فيها والتابعين لوكالة المسجد النبوي 36 موظفاً، وتعمل الإدارة على تحويل جميع الخدمات المقدمة للباحثين إلى خدمات إلكترونية ذكية بأحدث التقنيات. وتستقبل المكتبة الوفود كما يتم جرد المكتبة سنوياً وتزويدها بالكتب الجديدة عن طريق شراء الكتب من المعارض واستقبال الإهداءات من المؤلفين ودور النشر ونحو ذلك. يشار إلى أن قسم اللغات غير العربية يضم كتبا بلغات مختلفة كاللغة الأوردية والإنجليزية والفرنسية والتركية والفارسية والألمانية وغيرها، تزيد في مجملها عن 21 لغة، أما المكتبة الرقمية فتقوم على 71 جهاز حاسب آلي مرتبط بشبكة داخلية. المكتبة الرقمية تضم 71 جهاز حاسب آلي